347 skład chemiczny stali nierdzewnej Wielkość krwi żylnej lub włośniczkowej, specyficzna dla SARS-CoV-2, odpowiedzi komórek T określa odporność na COVID-19.

Dziękujemy za odwiedzenie Nature.com.Używasz wersji przeglądarki z ograniczoną obsługą CSS.Aby uzyskać najlepszą jakość, zalecamy użycie zaktualizowanej przeglądarki (lub wyłączenie trybu zgodności w przeglądarce Internet Explorer).Dodatkowo, aby zapewnić bieżące wsparcie, pokazujemy witrynę bez stylów i JavaScript.
Suwaki pokazujące trzy artykuły na slajd.Użyj przycisków Wstecz i Dalej, aby poruszać się po slajdach, lub przycisków kontrolera slajdów na końcu, aby poruszać się po poszczególnych slajdach.

Skład chemiczny stali nierdzewnej 347

Skład chemiczny cewki ze stali nierdzewnej 347

Skład chemiczny i właściwości mechaniczne cewki ze stali nierdzewnej 347 są następujące:
- Węgiel – maks. 0,030%
- Chrom – 17-19%
- Nikiel – 8-10,5%
- Mangan – maksymalnie 1%

Właściwości mechaniczne cewki ze stali nierdzewnej 347

Według producenta cewki ze stali nierdzewnej 347, właściwości mechaniczne rury cewki 347:
- Wytrzymałość na rozciąganie (psi) – 75 000 min
- Granica plastyczności (psi) – 30 000 min
- Wydłużenie (% w 2″) – 25% min
- Twardość Brinella (BHN) – 170 max

Zastosowania i zastosowania cewki ze stali nierdzewnej 347

• Rura cewkowa ze stali nierdzewnej 347 stosowana w cukrowniach.
• Rurka cewki ze stali nierdzewnej 347 stosowana w nawozach.
• Rura cewkowa ze stali nierdzewnej 347 stosowana w przemyśle.
• Rura cewkowa ze stali nierdzewnej 347 stosowana w elektrowniach.
• Rura cewkowa ze stali nierdzewnej 347 stosowana w żywności i nabiału.
• Rura cewkowa ze stali nierdzewnej 347 stosowana w zakładach naftowych i gazowych.
• Producent rur cewkowych ze stali nierdzewnej 347 stosowany w przemyśle stoczniowym.

Uważa się, że limfocyty T specyficzne dla SARS-CoV-2 chronią przed infekcją i postępem COVID-19, ale nie ma na to bezpośrednich dowodów.W tym miejscu porównaliśmy pomiary krwi pełnej limfocytów T specyficznych dla SARS-CoV-2 pod względem interferonu-γ-dodatniego z pozytywnymi wynikami testów diagnostycznych na Covid-19 (PCR i/lub przepływ boczny) w ciągu 6 miesięcy od pobrania krwi Liana.Spośród 148 uczestników, którzy oddali próbki krwi żylnej, wielkość odpowiedzi komórek T specyficznych dla SARS-CoV-2 była znacznie wyższa u osób, które pozostały chronione, niż u osób zakażonych (p < 0,0001).% ryzyko infekcji, natomiast wysoka intensywność zmniejszyła to ryzyko do 5,4%.Wyniki te uogólniono na dodatkowych 299 uczestników, którzy testowali skalowalny test krwi włośniczkowej, który mógł ułatwić dostęp do danych dotyczących odporności limfocytów T w skali populacyjnej (14,9% w porównaniu z 4,4%).Zatem pomiar limfocytów T specyficznych dla SARS-CoV-2 może przewidzieć ryzyko infekcji i powinien być oceniany podczas monitorowania stanu odporności osobnika i populacji.
Pomiar i zrozumienie odpowiedzi immunologicznej na zakażenie SARS-CoV-2 jest ważne dla opracowania skutecznych przyszłych strategii minimalizujących wpływ przyszłych wybuchów epidemii Covid-19 na zdrowie publiczne i gospodarkę.Identyfikacja korelatów immunologicznych dostarczy ważnych informacji na temat podatności populacji na infekcje wirusowe, być może wczesne ostrzeganie o szczytowym okresie hospitalizacji, a także umożliwi ludziom osobiste zarządzanie ryzykiem infekcji i ryzykiem zarażenia innych.Nadzór immunologiczny okazał się kluczowy dla oceny skuteczności szczepionek przeciwko Covid-19 u zdrowych pacjentów i pacjentów wysokiego ryzyka1,2,3, zwłaszcza u mutantów SARS-CoV-24, a wykrycie obniżonej odporności będzie oznaczać konieczność wzmocnienia odporności. Zaszczep się i zapobiegaj przyszłe epidemie.
Poziom odporności danej osoby na zakażenie SARS-CoV-2 zależy od wielu czynników: wiremii w momencie narażenia, wariantów wirusa, wieku, wcześniejszych szczepień/stanu infekcji, chorób współistniejących, przyjmowanych leków i, co najważniejsze, zakażenia anty-SARS-CoV .2 adaptacyjna odpowiedź immunologiczna pojawia się w momencie kontaktu z wirusem5.Ocena odpowiedzi immunologicznej na zakażenie SARS-CoV-2 i/lub szczepienie skupiła się na testach serologicznych, które mierzą obecność przeciwciał specyficznych dla białka strukturalnego (np. glikoproteiny kolczastej).Jednakże sama obecność lub brak przeciwciał nie określa dokładnie ochronnej odpowiedzi immunologicznej, ponieważ odpowiedzi te są znacząco osłabiane w czasie6, a neutralizacja wariantów SARS-CoV-2 u osób wracających do zdrowia lub podwójnie zaszczepionych. Słaba aktywność, która może prowadzić do dużej liczba przełomowych infekcji7.Rzeczywiście, ochrona przed objawową chorobą Covid-19 wywołaną przez wariant Omicron (B.1.1.529) spadła do około 10% już po 4–6 miesiącach szczepienia mRNA, chociaż ochrona przed ciężką chorobą utrzymywała się >68% przez co najmniej 7 miesięcy8.Pomiar odpowiedzi komórek T pamięci adaptacyjnej, które zapewniają długoterminową ochronę przed infekcją wirusową, jest najlepszym wskaźnikiem podatności na zakażenie SARS-CoV-2, a tym samym lepszym wskazaniem ryzyka pozytywnego wyniku testu na Covid-199, ponieważ specyficzne T komórki mogą zapobiec infekcji.bez serokonwersji10,11.Jednakże pomiarowi odpowiedzi limfocytów T poświęcono mniej uwagi ze względu na trudności metodologiczne i problemy logistyczne związane z pobieraniem i transportem próbek krwi żylnej, zwłaszcza podczas prowadzenia dużych badań obserwacyjnych w celu oceny skuteczności szczepionki i monitorowania odporności.Jednakże zaszczepione osoby wykazują silną aktywność limfocytów T przeciwko wariantom SARS-CoV-2, co potencjalnie kompensuje utratę reaktywności przeciwciał w celu ograniczenia ciężkości COVID-1912,13.
Tutaj staraliśmy się zrozumieć, czy pojedynczy pomiar odpowiedzi komórek T SARS-CoV-2 może przewidzieć bezwzględne ryzyko zakażenia SARS-CoV-2 w ciągu 6 miesięcy od pobrania krwi, niezależnie od wcześniejszych czynników wpływających na układ odpornościowy.Aby test na limfocyty T był wydajny i można go było zastosować w większych badaniach, staraliśmy się również zminiaturyzować test, aby można go było wykonać przy użyciu próbki krwi kapilarnej z palca.
Zmierzyliśmy komórkową i humoralną odpowiedź immunologiczną u zdrowych dawców, stosując skojarzone wykrywanie limfocytów T SARS-CoV-2 i przeciwciał IgG w oparciu o pełną krew żylną (charakterystyka uczestników, patrz marzec 2022 r. 14. U zaszczepionych dawców SARS-CoV-2- specyficzne odpowiedzi komórek T określono poprzez pomiar poziomu interferonu-γ (IFN-γ) w osoczu po stymulacji krwią pełną peptydem SARS-CoV-2 (jak poprzednio, ref. 14,15,16,17,18) i odpowiedzi IgG związane z nukleokapsydem (N) były zwiększone u tych, którzy zgłosili wcześniejszą infekcję, chociaż obie odpowiedzi były wyższe u wcześniej zakażonych nieszczepionych dawców, maksymalne w organizmie (ryc. 1a, b).Odpowiedzi IgG przeciwko glikoproteinom kolczastym (RBD, S1, S2) były najwyższe u wcześniej zakażonych zaszczepionych dawców (ryc. 1c – e).
Odpowiedzi limfocytów T IFN-γ+ specyficzne dla SARS-CoV-2 mierzono za pomocą testu pełnej krwi żylnej na podstawie szczepień uczestników i wcześniejszego stanu zakażenia SARS-CoV-2 (potwierdzonego metodą PCR i/lub testu przepływu bocznego)”. Vac + /Inf +' n = 60 (zielony), 'Vac + /Inf-' n = 82 (niebieski), 'Vac-/Inf +' n = 4 (żółty), 'Vac-/Inf-' n = 1 (Nie zastosowano).Reakcje wiązania IgG specyficzne dla SARS-CoV-2 ukierunkowane na nukleokapsyd („N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), wzbogacona domena wiążąca receptor („RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), podjednostka szczytowa 1 („S1”) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012), a szczytową podjednostkę 2 („S2”) (e) zmierzono za pomocą badań pełnej krwi żylnej na podstawie szczepienia uczestnika i wcześniejszego zakażenia SARS -CoV-2 (potwierdzonego metodą PCR i/ lub test przepływu bocznego) stan zakaźny.„Vac + /Inf +” n = 60 (zielony), „Vac + /Inf-” n = 71-82 (niebieski), „Vac-/Inf +” n = 4 (żółty).Porównań dokonano za pomocą testu Kruskala-Wallisa, skorygowanego o porównania wielokrotne za pomocą testu Dunna.Dane są wyświetlane w postaci wykresów (linia środkowa na medianie, górna granica na 75. percentylu, dolna granica na 25. percentylu) z wąsami na wartościach minimalnych i maksymalnych.Każda kropka oznacza dawcę.Surowe dane są dostarczane w postaci surowych plików danych.
Po pobraniu krwi uczestnicy zostali poproszeni o samodzielne zgłoszenie pozytywnych wyników testu PCR i/lub testu przepływu bocznego na obecność Covid-19;jeśli wynik testu uczestników w okresie od 1 września 2021 r. do 29 grudnia 2021 r. był pozytywny, uznano, że po 29 grudnia 2021 r. zostali zarażeni wirusem wariantu wirusa Delta (B.1.617.2) i Omicron (B.1.1.529) do Public Health Wales, kiedy ta opcja obaw staje się dominująca.Wśród 148 dawców możliwych do oceny zaobserwowaliśmy wskaźnik infekcji na poziomie 26,3% (39/148) w ciągu 6 miesięcy od oddania krwi, z których 38 otrzymało drugą lub trzecią dawkę szczepionki przeciwko COVID-19 (przełom w infekcji nastąpił po badaniu Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) szczepionka mRNA lub szczepionka AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));zakażony został także niezaszczepiony dawca.Wielkość odpowiedzi limfocytów T IFN-γ-dodatnich specyficznych dla SARS-CoV-2 była znacznie niższa u tych, którzy zgłosili pozytywny wynik testu diagnostycznego na Covid-19 niż u niezainfekowanych dawców (P <0,0001; ryc. 2a), głównie z powodu optymalna indukcja odpowiedzi komórek T przez szczepienie u niektórych uczestników (P = 0,050; dodatkowa ryc. 1).Nie było korelacji między wielkością odpowiedzi komórek T IFN-γ + a czasem uzyskania pozytywnego wyniku testu na obecność COVID-19 (rysunek uzupełniający 2).Natomiast ani odpowiedzi IgG wiążące RBD, S1, S2 (ryc. 2b – d), ani odpowiedzi przeciwciał neutralizujących RBD, S1 nie były specyficzne dla SARS-CoV-2 typu dzikiego lub delta (B.1.617).) (rysunek uzupełniający 3) pozwala rozróżnić osoby zagrożone infekcją.Jednak niskie odpowiedzi N-połączonych IgG przeciwko SARS-CoV-2 korelowały z ryzykiem zakażenia Covid-19 (P = 0,0084; Ryc. 2e);prawdopodobieństwo wystąpienia pozytywnego wyniku było o 85% mniejsze (p = 0,00035; OR 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (rysunek uzupełniający 4).
Próbki krwi żylnej od zdrowych dawców (n = 148) oceniały odpowiedź komórek T IFN-γ+ specyficzną dla SARS-CoV-2 (a; ****P < 0,0001) i wiązanie receptora Spike'a ze specyficznym SARS-CoV -2 bodziec.domena („RBD”) (b), podjednostka spike 1 („S1″) (c), podjednostka spike 2 („S2″) (d) i nukleokapsyd („N”) (e; **P = 0,0084 ) .Zidentyfikowano uczestników, którzy uzyskali pozytywny wynik testu na obecność Covid-19 (PCR i/lub przepływ boczny);wszystkie zakażenia wystąpiły w ciągu 6 miesięcy od pobrania krwi.Porównań dokonano za pomocą dwustronnego testu Manna-Whitneya.Dane są wyświetlane w postaci wykresów (linia środkowa na medianie, górna granica na 75. percentylu, dolna granica na 25. percentylu) z wąsami na wartościach minimalnych i maksymalnych.Każda kropka oznacza dawcę.ns nie jest ważne.Mapa cieplna f pokazuje korelacje rang Spearmana między zmiennymi dla określonego zbioru danych.Porównania, które nie były istotne statystycznie, wykluczono z macierzy i oznaczono pustymi komórkami.Surowe dane są dostarczane w postaci surowych plików danych.
Uznano, że wstępnie ustawiony pozytywny punkt odcięcia diagnostyczny wynoszący 14 jest zbyt arbitralny, aby ocenić ryzyko ponownej infekcji, dlatego ustalono rozstępy międzykwartylowe w celu ustalenia bezwzględnych parametrów ryzyka.Model statystyczny, który obejmował jedynie zmienne, które miały istotny wpływ na wyniki, wykazał, że wielkość odpowiedzi limfocytów T IFN-γ+ specyficznych dla SARS-CoV-2 była najważniejszym biomarkerem immunologicznym pozwalającym określić szanse danej osoby na bycie zdrowym. przebadany na Covid.-19 dodatnie (rysunek 2f i rysunek uzupełniający 4).Pacjenci ze specyficzną dla SARS-CoV-2 odpowiedzią limfocytów T IFN-γ+ w trzecim (194–489 pg/ml IFN-γ) i czwartym (>489 pg/ml IFN-γ) kwartylu 65% (P = 0,055; OR 0,35, 95% CI: 0,11–1,00) i 90% (P = 0,0050; OR 0,098, 95% CI: 0,014–0,42) miało więcej uczestników.Szanse są niewielkie (rysunek uzupełniający 4).Ogólnie rzecz biorąc, u uczestników ze specyficzną odpowiedzią limfocytów T na SARS-CoV-2 z krwi żylnej ≤79 pg/ml IFN-γ ryzyko przełomowego zakażenia po 6 miesiącach wynosiło 43,2% w porównaniu z odpowiedzią >489 pg/ml.ml IFN-γ ryzyko infekcji wynosiło 5,4% (tabela 2).
Badanie pełnej krwi żylnej ma ograniczony zakres ze względu na konieczność pobrania próbki przez flebotomistę.Aby zwiększyć dostępność testów na limfocyty T i IgG na obecność SARS-CoV-2, opracowano alternatywną metodę pobierania próbek krwi włośniczkowej, która umożliwia uczestnikom uzyskanie próbek krwi z palca w domu.Według naszej najlepszej wiedzy nie było wcześniejszych doniesień na temat pomiaru funkcji limfocytów T specyficznych dla antygenu w próbkach krwi włośniczkowej.Wykazano wcześniej silną korelację między liczbą limfocytów uzyskaną przy użyciu porównywalnych próbek krwi włośniczkowej i żylnej.Ponadto donoszono, że testy na bazie krwi pełnej mierzące odpowiedź komórek T specyficznych dla SARS-CoV-2 wykorzystują tylko 320 µl krwi żylnej,20 eliminując obawy dotyczące częstości występowania progenitorowych komórek T w próbkach krwi włośniczkowej.
Wykorzystaliśmy ten wysokowydajny, standaryzowany, wspólny test limfocytów T SARS-CoV-2 i przeciwciał IgG, oparty na pełnej krwi włośniczkowej, do pomiaru komórkowej i humoralnej odpowiedzi immunologicznej u uczestników z różnymi chorobami współistniejącymi i statusem wcześniejszego szczepienia/infekcji (Tabela 1).zostali zrekrutowani z całej Wielkiej Brytanii w okresie od 24 stycznia do 14 marca 2022 r. 14. Większość (90,9%) próbek palców została prawidłowo pobrana i wysłana do laboratorium w ciągu 24 godzin od pobrania.W niektórych przypadkach próbki otrzymano w ciągu 48 godzin od pobrania krwi, ale żadna z tych próbek nie przeszła kontroli kontroli jakości i nie miała wpływu na ogólne pomiary limfocytów T lub przeciwciał (rysunek uzupełniający 5).Chociaż istniały różnice w wielkości odpowiedzi komórek T IFN-γ+ specyficznej dla SARS-CoV-2 mierzonej w odpowiednich próbkach krwi włośniczkowej i żylnej u niektórych osób, ogólnie nie było znaczących różnic (P = 0,88; ryc. dodatkowa 6). ).).
Odpowiedzi komórek T IFN-γ+ specyficzne dla SARS-CoV-2 były znacząco zwiększone u zaszczepionych osób, które zgłosiły również wcześniejszą infekcję (P = 0,0001), ale nie znacząco wyższe niż u wcześniej zakażonych nieszczepionych dawców ( P = 0,19, ryc. 3a).).Odpowiedzi IgG przeciwko glikoproteinie kolczastej (RBD, S1, S2) były znacząco wyższe u dawców zaszczepionych niż u dawców nieszczepionych, niezależnie od wcześniejszego stanu zakażenia (ryc. 3b-d).Co ciekawe, średnia odpowiedź IgG związanej z N była najwyższa u wcześniej zakażonych nieszczepionych uczestników w porównaniu z uczestnikami zaszczepionymi, chociaż nie osiągnęła ona istotności (ryc. 3e).Wśród nieszczepionych i niezakażonych dawców, którzy sami się zadeklarowali, 15 z 37 (40,5%) uczestników miało wynik pozytywny na obecność N-połączonych IgG, powyżej wcześniej ustalonego progu 2,0 BAU/ml14;tych 15 uczestników Dwunastu z tych pacjentów uzyskało pozytywny wynik testu na odpowiedź limfocytów T IFN-γ+ powyżej wcześniej ustalonego progu wynoszącego 22,7 pg/ml IFN-γ14.Dlatego jest prawdopodobne, że uczestnicy ci byli wcześniej zakażeni SARS-CoV-2 i nie zostali przebadani na obecność COVID-19 ze względu na osobisty wybór, brak sprzętu do PCR i/lub przepływu bocznego lub nie mieli żadnych objawów.Chociaż istniała istotna korelacja między odpowiedziami komórek T na poziomy IFN-γ+ i N-połączonych IgG u nieszczepionych dawców (P = 0,0044; rysunek uzupełniający, odpowiedź N-połączonych IgG zmniejszała się szybciej niż odpowiedź N-połączonych IgG, podczas gdy IFN-γ + Odpowiedzi limfocytów T utrzymywały się niezależnie od statusu szczepienia, chociaż liczba dawców 50 tygodni po prowokacji była niska (ryc. uzupełniająca 8). Rodzaj szczepienia był generalnie nieznacznie różny w obserwowanych odpowiedziach IgG specyficznych dla SARS-CoV-2, T komórek i związanych z RBD, chociaż uczestnicy, którzy otrzymali dwie dawki BNT162b2, a następnie ponowne szczepienie mRNA1273, wykazali znacząco wyższy poziom limfocytów T IFN-γ +, byli bardziej wrażliwi na SARS-CoV-2 niż ci, którzy otrzymali dwie dawki ChAdOx1 i BNT162b2 (uzupełniające Ryc. 9) Ponadto zgłaszane choroby współistniejące miały niewielką ogólną różnicę w obserwowanych odpowiedziach komórek T w porównaniu ze zdrowymi dawcami (rysunek uzupełniający 10).
Odpowiedzi komórek T IFN-γ+ specyficzne dla SARS-CoV-2 mierzono za pomocą testu kapilarnego pełnej krwi i opierano się na szczepieniach uczestników i wcześniejszym statusie zakaźnym SARS-CoV-2 (potwierdzonym metodą PCR i/lub testem przepływu bocznego).„Vac + /Inf +” n = 42 (zielony), „Vac + /Inf-” n = 158 (niebieski), „Vac-/Inf +” n = 33 (żółty), „Vac- /Inf-” n = 37 (szary).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .Reakcje wiązania IgG specyficzne dla SARS-CoV-2 z domeną wiążącą receptor kolca („RBD”) (b; ****P < 0,0001, ns: nieistotne), podjednostka szczytowa 1 („S1”) (c; * * **P < 0,0001, ns: nieistotne), podjednostka 2 („S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016 ) i nukleokapsyd („N”) (e; ****P < 0,0001, ns nieistotne) mierzono za pomocą analizy pełnej krwi żylnej na podstawie szczepień uczestników i wcześniejszego zakażenia SARS-CoV-2 (potwierdzonego metodą PCR i/lub analizą przepływu bocznego). Zakażenia podzielono według status.„Vac + /Inf +” n = 46 (zielony), „Vac + /Inf-” n = 182 (niebieski), „Vac-/Inf +” n = 34 (żółty), „Vac-/Inf-” n = 37 (szary).Porównań dokonano za pomocą testu Kruskala-Wallisa, skorygowanego o porównania wielokrotne za pomocą testu Dunna.Dane są wyświetlane w postaci wykresów (linia środkowa na medianie, górna granica na 75. percentylu, dolna granica na 25. percentylu) z wąsami na wartościach minimalnych i maksymalnych.Każda kropka oznacza dawcę.Surowe dane są dostarczane w postaci surowych plików danych.
Tak jak poprzednio, uczestnicy zostali poproszeni o zgłoszenie pozytywnych wyników PCR i/lub bocznego przepływu krwi w kierunku COVID-19;według brytyjskiej Agencji Zdrowia zakładano, że w momencie testowania pozytywnego wariantu wirusa uczestnicy zostali zakażeni koronawirusem Omicron (B.1.1.529), ponieważ w Wielkiej Brytanii był to wariant dominujący w okresie badania.Wśród 299 dawców możliwych do oceny zaobserwowaliśmy wskaźnik infekcji wynoszący 8,0% (24/299) w ciągu trzech miesięcy od pobrania krwi włośniczkowej, z czego siedmiu nie było zaszczepionych.Odsetek chorób współistniejących wśród wszystkich uczestników był niższy u osób, które uzyskały pozytywny wynik testu na Covid-19 (10,7%) niż u tych, które uzyskały negatywny wynik testu na Covid-19 (24,4%, tabela 1), co może wynikać z faktu, że uczestnicy z pewnymi choroby są ostrożniejsze i chronią przed potencjalnymi konsekwencjami, takimi jak cukrzyca i nowotwór.Jak zaobserwowano w kohorcie krwi żylnej, limfocyty T dodatnie pod względem interferonu-γ (IFN-γ) specyficznego dla SARS-CoV-2 mierzono w próbkach krwi włośniczkowej od osób zgłaszających pozytywny wynik testu diagnostycznego na obecność COVID-19.Wielkość odpowiedzi była znacznie niższa niż u niezainfekowanych dawców (P = 0, 034; Figura 4a) ze względu na stosunkowo słabą indukcję odpowiedzi komórek T przez szczepienie i / lub wcześniejszą infekcję (Uzupełniająca Figura 11).Podobnie, ani odpowiedzi IgG wiążące RBD, S1, S2 (ryc. 4b – d), ani odpowiedzi przeciwciał neutralizujących RBD, S1 nie były specyficzne dla SARS-CoV-2 typu dzikiego lub delta (B. 1.617).(Dodatkowy rysunek 12).Można zidentyfikować osoby o jakimkolwiek znaczącym ryzyku infekcji.W przeciwieństwie do kohorty żylnej, odpowiedzi IgG związane z N również nie różnicują ryzyka Covid-19 (ryc. 4e), co sugeruje, że wariant Omicron (B.1.1.529) zwiększa unikanie odporności u osób wcześniej zakażonych, jak niedawno opisano 21. Natomiast siła odpowiedzi komórek T IFN-γ specyficznej dla SARS-CoV-2 była ponownie najważniejszą zmienną przy określaniu indywidualnych szans na pozytywny wynik testu na obecność COVID-19 (ryc. 4f).Ogólnie rzecz biorąc, u uczestników ze specyficzną dla SARS-CoV-2 odpowiedzią włośniczkowych komórek T wynoszącą ≤23,7 pg/ml IFN-γ ryzyko infekcji po trzech miesiącach wynosiło 14,9% w porównaniu z odpowiedzią >141,6 pg/ml.ml IFN.-γ ryzyko infekcji wynosiło 4,4% (Tabela 2).
Odpowiedzi komórek T IFN-γ+ specyficzne dla SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) i specyficznej dla SARS-CoV-2 domeny wiążącej receptor IgG („RBD”) specyficznej dla SARS-CoV-2 („RBD”) (b), podjednostka szczytowa 1 („ S1′) (c), podjednostka kolczasta 2 („S2′) (d) i reakcja wiązania nukleokapsydu („N”) (e).Uczestnicy, których testy na obecność wirusa Covid-19 (PCR i/lub test bocznego przepływu krwi) uzyskały wynik pozytywny, wszystkie infekcje wystąpiły w ciągu 3 miesięcy od pobrania krwi.Porównań dokonano za pomocą dwustronnego testu Manna-Whitneya.Dane są wyświetlane w postaci wykresów (linia środkowa na medianie, górna granica na 75. percentylu, dolna granica na 25. percentylu) z wąsami na wartościach minimalnych i maksymalnych.Każda kropka oznacza dawcę.ns nie jest ważne.Mapa cieplna f pokazuje korelacje rang Spearmana między zmiennymi dla określonego zbioru danych.Porównania, które nie były istotne statystycznie, wykluczono z macierzy i oznaczono pustymi komórkami.Surowe dane są dostarczane w postaci surowych plików danych.
W miarę wchodzenia w kolejną fazę pandemii Covid-19 punkt ciężkości przesunie się z zapobiegania na indywidualne zarządzanie ryzykiem i identyfikację bezbronnych członków społeczeństwa.Ustalenie korelatów odporności na Covid-19 ma kluczowe znaczenie dla skutecznej identyfikacji i leczenia tych grup wysokiego ryzyka.Obecnie istnieje coraz więcej dowodów na to, że odporność limfocytów T chroni przed infekcją SARS-CoV-2 i ogranicza ciężkość Covid-1910.Przedstawione tutaj dane pokazują, że łączna siła odpowiedzi komórek T IFN-γ+ specyficznych dla SARS-CoV-2 na białka strukturalne typu spike, błona i nukleokapsyd zapewnia większą ochronę przed COVID-19 niż wiązanie przeciwciał.19 promuje lub neutralizuje reakcje .i należy je wziąć pod uwagę przy ocenie odporności indywidualnej i/lub zbiorczej.Wirusy RNA, takie jak SARS-CoV-2 lub wirus grypy A (IAV), unikają neutralizacji serologicznej poprzez szybką ewolucję odsłoniętych epitopów komórek B na antygenach powierzchniowych rozpoznawanych przez przeciwciała.Ochronna odpowiedź immunologiczna zapewniana przez limfocyty T może odzwierciedlać celowanie w epitopy z bardziej konserwatywnych regionów białek wirusowych, które nie mogą szybko uciec przed odpowiedzią immunologiczną.Ochrona za pośrednictwem limfocytów T przed nowymi wariantami SARS-CoV-2 jest podobna do ochrony heterosubtypowej, w której pośredniczy celowanie komórek T w konserwatywne białka wewnętrzne obserwowane w podtypach IAV22,23.
Pomimo ogromnego potencjału pomiaru komórkowej odpowiedzi immunologicznej na Covid-19, stosunkowo niewiele uwagi poświęcono opracowaniu dokładnych, wysokowydajnych i standaryzowanych testów na limfocyty T.Tradycyjne zawiłości i koszty związane z pomiarem odpowiedzi limfocytów T uniemożliwiają dokładne określenie odporności limfocytów T podczas badań przesiewowych pod kątem odporności dużej populacji.Chociaż niedawno dostępnych stało się kilka komercyjnych testów stymulacji peptydami z krwi pełnej, obecnie każdy potrzebuje flebotomisty w celu uzyskania krwi, co ogranicza dostępność i skalę.Do określenia częstości występowania przeciwciał SARS-CoV-2 w populacji powszechnie stosuje się systemy krwi włośniczkowej.Dostosowaliśmy testy krwi włośniczkowej do testów stymulacji peptydami z krwi pełnej w celu oceny reaktywności komórek T na białka strukturalne SARS-CoV-2 i odpowiedzi przeciwciał specyficznych dla SARS-CoV-2.W rzeczywistości łączny pomiar przeciwciał specyficznych dla SARS-CoV-2 i limfocytów T w tej samej próbce krwi włośniczkowej jest bardzo atrakcyjny: (i) zmniejsza potrzebę wielokrotnych badań krwi na uczestnika, (ii) poprawia doświadczenie i zrozumienie uczestnika;(iii) usprawnić logistykę i ograniczyć powielanie działań, (iv) zmniejszyć wpływ na środowisko, ponieważ wymaganych jest mniej materiałów laboratoryjnych i dostarczania próbek.Chociaż ogólna reaktywność IFN-γ była podobna w dobranych próbkach krwi żylnej i włośniczkowej, zaobserwowano, że jest niższa w kohorcie uczestników z krwią włośniczkową (ryc. 4a) w porównaniu z kohortą krwi żylnej (ryc. 2a).Wartości IFN-γ Istnieje kilka wyjaśnień tego odkrycia, a mianowicie duża liczba uczestników z chorobami współistniejącymi wymagającymi terapii immunosupresyjnej została zrekrutowana do kohorty pobierania próbek krwi włośniczkowej (Tabela 1), a żywotność i/lub funkcja limfocytów T uzyskanych z naczyń naczyniowych próbek może być niska, szczególnie biorąc pod uwagę warunki długotrwałego przechowywania próbek przed stymulacją peptydową.
Obecnie powszechnie dostępna szczepionka przeciwko COVID-19 zapewnia najlepszą ochronę przed ciężką chorobą u większości biorców w ciągu 6 miesięcy od zaszczepienia8.Co zachęcające, pomimo słabej indukowanej szczepionką serologicznej neutralizacji wariantów SARS-CoV-26,7, odpowiedzi komórek T wywołane szczepieniem przeciwko SARS-CoV-2 typu dzikiego pozostały wysoce reaktywne, ponieważ pojawiło się 25 innych.Przedstawione tutaj dane pokazują znaczenie szerszej oceny immunogenności szczepionki, podkreślając szczepionki o niewystarczającej odporności limfocytów T, aby zapobiec nagłej infekcji i trwałemu przeniesieniu wirusa.Zaobserwowaliśmy również, że wiele nieszczepionych osób włączonych do kohorty naczyń włosowatych wykazywało znaczącą odpowiedź limfocytów T specyficznych dla SARS-CoV-2 (i IgG wiążących N) niezależnie od poprzedniego szczepienia, co jest prawdopodobnie spowodowane wcześniejszą infekcją.Zamiast szczepić odpowiednie osoby, ryzyko zakażenia należy ocenić na podstawie ich aktualnego statusu szczepień i dokonanych świadomych wyborów.
Ograniczenia tego badania obejmują pewność, że uczestnicy sami zgłosili zakażenie SARS-CoV-2 po pobraniu krwi w celu określenia znaczenia odporności;niektórzy uczestnicy mogą mieć bezobjawową infekcję i nie mogą przejść testu PCR i/lub testu przepływu bocznego na obecność Covid-19.W naszym zbiorze danych brakowało również informacji o lekach przyjmowanych przez uczestników w momencie pobierania krwi.Ponadto, biorąc pod uwagę, że wszyscy nasi uczestnicy zgłaszali jedynie łagodne/umiarkowane objawy lub nie zgłaszali żadnych objawów, nie było możliwe zidentyfikowanie odpowiedzi immunologicznej na podstawie naszego zestawu danych, które przewidywały zwiększone ryzyko ciężkiej choroby i hospitalizacji z powodu Covid-19.Jednakże obecność odpowiedzi limfocytów T CD8+ na epitopy specyficzne dla nukleokapsydu została ostatnio powiązana z ochroną przed ciężkim zakażeniem wirusem Covid-1926.Ponadto zastosowany tutaj test nie mierzył odpowiedzi komórek T na specyficzne, wcześnie ulegające ekspresji niestrukturalne białka SARS-CoV-2, które, jak niedawno wykazano, preferencyjnie gromadzą się u seronegatywnych pracowników służby zdrowia, którzy mieli kontakt z zakażonymi pacjentami.Na podstawie tej pracy, biorąc pod uwagę częstość przenoszenia wirusa w społeczności w momencie rekrutacji i wysokie prawdopodobieństwo zakażenia kontaktowego w populacji, liczba limfocytów T specyficznych dla SARS-CoV-2 wykryta w naszych testach również wydaje się być zdolna do usunięcia.subklinicznych infekcji w naszych kohortach.Wreszcie nie mierzyliśmy wytwarzania interleukiny 2 przez komórki T, ponieważ nasza poprzednia praca wykazała słabą identyfikację odpowiedzi komórek T specyficznych dla SARS-CoV-214, chociaż odpowiedzi specyficzne dla IL-2 mogą wskazywać na istniejącą wcześniej reaktywność krzyżową.komórki związane z obroną przed zakażeniem SARS-CoV-211.
Podsumowując, dane te podkreślają zasadniczą potrzebę przeprowadzenia długoterminowych badań podłużnych, które uwzględnią odpowiedzi komórek T specyficznych dla SARS-CoV-2 w miarach odporności w skali populacji.Wysiłki te mogą zostać wsparte opracowaniem nowego badania krwi włośniczkowej mierzącego odpowiedź limfocytów T.
Do projektu badawczego rekrutowano uczestników od lutego 2021 r. do marca 2022 r. Kohorta zdrowych dawców (n = 148), którzy oddali próbki krwi żylnej, składała się głównie z pracowników uniwersyteckich i studentów uczestniczących w programie badań przesiewowych na obecność wirusa Covid-19 na Uniwersytecie w Cardiff lub z personelu szkoły podstawowej w Cardiff.Wszyscy uczestnicy byli poza tym zdrowi i nie zgłaszali przyjmowania żadnych leków immunosupresyjnych (charakterystyka znajduje się w Tabeli 1).Kohorta uczestników, którzy oddali próbki krwi włośniczkowej, obejmowała wszystkich dobrowolnych dawców (w wieku powyżej 18 lat) z całej Wielkiej Brytanii.W dniach 24 stycznia – 14 marca 2022 r. do badania włączono 342 uczestników, z czego 299 przekazało do laboratorium próbki krwi.Wielu uczestników pozostało nieszczepionych i/lub zgłaszało poważne choroby współistniejące, w tym choroby autoimmunologiczne i nowotwory (charakterystyka patrz Tabela 1).Badanie to uzyskało aprobatę etyczną od Komisji ds. Etyki Badań w Newcastle i North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) oraz Komisji ds. Etyki ds. Badań Naukowych Uniwersytetu w Cardiff (ref. SREC: SMREC 21/01).Wszyscy uczestnicy wyrazili pisemną świadomą zgodę przed włączeniem.Uczestnicy nie otrzymali żadnego wynagrodzenia za udział w tym badaniu.
Próbki krwi żylnej pobierano przez wkłucie żyły do ​​próżniowych pojemników z heparyną litową lub sodową (BD) o pojemności 6 lub 10 ml.Próbki krwi włośniczkowej pobierano za pomocą lancetu palcowego, a następnie zbierano w mikropojemnikach z heparyną (BD).Wymagane jest minimum 400 µl krwi;każda próbka mniejsza niż ta ilość zostanie odrzucona.Inne przyczyny odrzucenia próbki obejmowały masową koagulację i / lub hemolizę oraz brak pobrania lepkiego osocza do analizy (rysunek uzupełniający 5).W sumie dostępnych było 299 próbek krwi włośniczkowej do oceny odpowiedzi przeciwciał, z czego 270 próbek było również dostępnych do oceny odpowiedzi limfocytów T.
Odpowiedzi limfocytów T specyficzne dla SARS-CoV-2 oceniano za pomocą testu Immuno-T na obecność wirusa COVID-19 (ImmunoServ Ltd) i przeprowadzono zgodnie z wcześniejszym opisem14.W skrócie, od każdego uczestnika pobrano jeden żylny próżniak z heparyną sodową (BD) o pojemności 6 ml lub 10 ml i poddano obróbce w laboratorium w ciągu 12 godzin od pobrania krwi.Chociaż większość próbek przetwarzano w ciągu 24 godzin, jedną 400–600 µl heparynizowanej krwi włośniczkowej (BD) pobrano w ciągu 48 godzin od pobrania próbki z palca.Próbki krwi żylnej i/lub włośniczkowej stymulowano oddzielnymi pulami peptydów specyficznymi dla SARS-CoV-2 (wariant typu dzikiego), jak opisano wcześniej14.Ta biblioteka peptydów zawiera 420 15-merowych sekwencji z 11 nakładającymi się aminokwasami obejmującymi całe białko kolca (S1 i S2) (S; białko NCBI: QHD43416 1), fosfoproteinę nukleokapsydu (NP; białko NCBI: QHD43423 2) i glikoproteinę błonową (M ; Białko NCBI: QHD43419 1) sekwencje kodujące (określane jako „kombinatoryczna biblioteka peptydów S-/NP-/M”).Wszystkie peptydy oczyszczono do >70%, rozpuszczono w sterylnej wodzie i zastosowano w końcowym stężeniu 0,5 μg/ml na peptyd.Próbki inkubowano w temperaturze 37°C przez 20-24 godziny.Probówki następnie wirowano przy 5000 x g przez 3 minuty i z wierzchu każdej próbki krwi zebrano ~150 µl osocza.Przechowuj próbki osocza w temperaturze -20°C przez okres do jednego miesiąca przed wykonaniem testów na obecność cytokin/przeciwciał.
Pomiar IFN-γ mierzono przy użyciu zestawu IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, numer katalogowy 430116) i przeprowadzono zgodnie z instrukcjami producenta.Natychmiast po dodaniu roztworu zatrzymującego (2N H2SO4) mikropłytkę odczytano przy 450 nm przy użyciu czytnika płytek BioLegend Mini ELISA.IFN-γ określono ilościowo za pomocą ekstrapolacji krzywej standardowej przy użyciu GraphPad Prism.Wartości poniżej dolnej granicy wykrywalności testu rejestrowano jako 7,8 pg/ml, wartości powyżej górnej granicy wykrywalności testu rejestrowano jako 1000 pg/ml.
Przeciwciała anty-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG mierzono przy użyciu 4-pleksowego panelu Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 (Bio-Rad, nr kat. 12014634) i znakowano zgodnie z Instrukcja producenta .instrukcje .Próbki wykazujące wartości przekraczające granicę oznaczalności poddano ponownej analizie w rozcieńczeniu 1:1000.Średnią intensywność fluorescencji perełek mierzono za pomocą aparatu Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Stężenia przeciwciał obliczono za pomocą testu pojedynczej kontroli VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) i przeliczono na międzynarodowe jednostki referencyjne WHO/NIBSC 20/136 (BAU/ml) przy użyciu współczynnika kalibracji producenta.
Przeciwciała neutralizujące specyficzne dla podjednostki RBD i S1 przeciwko SARS-CoV-2 typu dzikiego i liniom SARS-CoV-2 delta (B.1.617) mierzono przy użyciu zestawu Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad, nr kat. 12016897), zgodnie z instrukcją producenta.Zmierz średnią intensywność fluorescencji na urządzeniu Bio-Plex 200 (Bio-Rad) i oblicz procent hamowania (tj. neutralizacji) za pomocą następującego wzoru:
Testy neutralizacji zakaźnej SARS-CoV-2 przeprowadzono w sposób opisany wcześniej28.W skrócie, 600 PFU SARS-CoV-2 typu dzikiego inkubowano z 3-krotnymi seryjnymi rozcieńczeniami osocza w dwóch powtórzeniach przez 1 godzinę w temperaturze 37°C.Następnie mieszaninę dodano do komórek VeroE6 na 48 godzin.Monowarstwy utrwalono 4% paraformaldehydem, permeabilizowano 0,5% NP-40 i inkubowano przez 1 godzinę w buforze blokującym (PBS zawierający 0,1% tween i 3% odtłuszczonego mleka).Do buforu blokującego dodano przeciwciało pierwszorzędowe (antynukleokapsyd 1C7, Stratech) na 1 godzinę w temperaturze pokojowej.Po przemyciu, do buforu blokującego na 1 godzinę dodano przeciwciało drugorzędowe (anty-mysie IgG-HRP, Pierce).Monowarstwy przemyto, wywołano przy użyciu Sigmafast OPD i odczytano na czytniku płytek Clariostar Omega.Do każdego doświadczenia jako kontrole włączono studzienki bez wirusa, bez wirusa, ale bez przeciwciał i znormalizowane surowice wykazujące pośrednią aktywność.
Analizę statystyczną przeprowadzono w programie GraphPad Prism (wersja 9.4.1).Normalność zbioru danych sprawdzono za pomocą testu Shapiro-Wilka.Do wszystkich porównań zastosowano kryteria nieparametryczne.Dla próbek niesparowanych zastosowano test Manna-Whitneya.Wszystkie testy były dwustronne, a nominalny próg istotności P ≤ 0,05.
Wstępną analizę eksploracyjną zbioru danych przeprowadzono w języku R (wersja 4.0.3).Obejmuje to opracowanie jednowymiarowej macierzy korelacji rang Spearmana, w której korelację między dwiema zmiennymi reprezentuje wielkość i kolor kwadratów.Istotność statystyczną pomiędzy powiązaniami obliczono za pomocą rho Spearmana, gdzie za istotne uznano wartości ≤0,05.Porównania, które nie były istotne statystycznie, wykluczono z macierzy i oznaczono pustymi komórkami.Wartości P skorygowano dla wielokrotnych porównań za pomocą poprawki Holma.Do symulacji wpływu zmiennych w zbiorze danych na pozytywną reakcję na Covid-19 wykorzystano binarny model regresji logistycznej.Odpowiedzi komórek T IFN-γ i wyniki miana przeciwciał anty-RBD/S1/S2/N IgG przeliczono na czynniki, gdzie każdego osobnika przypisano do odpowiedniego kwartyla dla każdego wyniku.Następnie opracowano wstępny model badawczy wykorzystując funkcję glm z pakietu statystycznego (V4.0.3).Ilorazy szans wyprowadzone z tego oryginalnego modelu zostały wyodrębnione ze współczynników modelu przy użyciu funkcji „odds_plot” w pakiecie OddsPlotty (V1.0.2).Opracowując model walidacji krzyżowej, wykorzystaliśmy funkcję „bestglm” z pakietu bestglm (V0.37.3), aby ograniczyć stronniczość użytkownika i zapewnić wybór najlepszego podzbioru predyktorów.Wybrana metoda była „wyczerpująca”, a kryterium informacyjnym zastosowanym do oceny dopasowania modelu był AIC.Do uzyskania ilorazu szans zastosowano tę samą procedurę opisaną powyżej.
Więcej informacji na temat projektu badania można znaleźć w streszczeniu badania Nature, do którego link znajduje się w tym artykule.
Listy i prośby o materiały należy kierować do dr Martina Scarra lub profesora Andrew Godkina.W tym artykule przedstawiono oryginalne dane.
Kod R używany do tworzenia modeli statystycznych jest publicznie dostępny bez żądania29.Informacje o przedruku i licencje można znaleźć na stronie www.nature.com/reprints.
Munro, APS i in.Bezpieczeństwo i immunogenność siedmiu szczepionek przeciwko COVID-19 jako trzeciej dawki (dawki przypominającej) po dwóch dawkach ChAdOx1 nCov-19 lub BNT162b2 (COV-BOOST) w Wielkiej Brytanii: faza 2, zaślepione, wieloośrodkowe, randomizowane, kontrolowane badanie.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV i in.Immunogenność, bezpieczeństwo i reaktogenność heterologicznego pierwotnego szczepienia przeciwko COVID-19 (Com-COV2) z użyciem mRNA, wektorów wirusowych i szczepionek z adiuwantem białkowym w Wielkiej Brytanii: faza 2, pojedynczo ślepa, randomizowana próba, test równoważności.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB i in.Skuteczność szczepionek przeciwko Covid-19 u pacjentów z obniżoną odpornością: przegląd systematyczny i metaanaliza.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. i in.Zmniejszona neutralizacja wariantu mikronowego SARS-CoV-2 B.1.1.529 przez surowicę po immunizacji.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y i Baliser RD Przełomowa infekcja u osób zaszczepionych SARS-CoV-2: pomiar, przyczyny i konsekwencje.Narodowy Kapłan Immunologii.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG i in.Osłabiona odpowiedź immunologiczna na szczepionkę BNT162b2 Covid-19 przez 6 miesięcy.N. inż.J. Medycyna.385, e84 (2021).
Carreño, JM i in.Aktywność surowic rekonwalescencji i szczepionek przeciwko SARS-CoV-2 Omicron.Natura 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. i in.Czas ochrony katarskiej szczepionki mRNA przeciwko podwariantom SARS-CoV-2 Omicron BA.1 i BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ i in.Częstotliwość komórek pamięci B zmniejsza się wraz z przełomową infekcją szczepionką delta Covid-19.Medycyna Molekularna EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. i in.Limfocyty T pamięci reaktywnej krzyżowo są powiązane z ochroną osób kontaktowych z Covid-19 przed infekcją SARS-CoV-2.Gmina narodowa.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH i in.Charakterystyczne odpowiedzi komórek T i B reagujących na omikrony SARS CoV-2 u osób zaszczepionych szczepionką przeciwko CoV-19.nauka.Immunologia.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu i in.Dziedziczne komórki T specyficzne dla SARS-CoV-2 rozpoznają krzyżowo warianty Omicron.Medycyna narodowa.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ i in.Pomiar limfocytów T specyficznych dla SARS-CoV-2 w pełnej krwi ujawnia bezobjawowe zakażenie i immunogenność szczepionki u zdrowych osób i pacjentów z rakiem narządów litych. Immunologia https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT i in.Szybki pomiar liczby limfocytów T typu spike T SARS-CoV-2 w krwi pełnej zaszczepionych i naturalnie zakażonych osób.J. Kliniczny.inwestować.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, UE i in.Odpowiedź na szczepionkę przeciwko COVID-19 u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym.zainstalować.Neurony.91, 89–100 (2022).
Bradley RE i in.Trwała infekcja COVID-19 z zespołem Wiskotta-Aldricha ustąpiła po szczepieniu terapeutycznym: opis przypadku.J. Kliniczny.Immunologia.42, 32–35 (2022).